酶试剂活性和纯度检测技术标准研究

谭和平、周李华、沈兴中、孙登峰、叶德萍、王智、唐祥凯

四川省科技进步奖

二等奖

四川省人民政府

2015

生物所

酶试剂等科研试剂是人类基因组计划、干细胞研究、精准医学等国家重大科学计划的基础性战略物质，与科学方法、科学仪器共同被视为国家科技创新的三大支柱，被持续地、明确地列入国家“十一五”、“十二五”科学技术发展规划。酶试剂活性及纯度是实现其功能的关键指标，长期以来由于缺乏科学统一的检测方法和评价技术，导致了我国重大科学计划受阻并依赖发达国家的严峻后果。在此背景下，本项目历经两个五年计划，在国家科技部科研试剂专项（2009BAK61B04、2012BAK25B01）、国家质检总局质检公益专项（201010212、201310240）、国家标准化项目等多个项目持续支持下，以固体复合酶（果糖二磷酸钠（FDP）含量专用测定固体复合酶）和分子生物学工具酶（T4 DNA 连接酶、限制性内切酶EcoRI、Taq DNA聚合酶）为研究对象，攻关了酶活性和纯度检测关键技术。成果主要贡献如下： （1）通过系统研究，优选并确定固体复合酶活性测定的最佳测量条件，首次建立了果糖二磷酸钠（FDP）含量专用测定固体复合酶（ALD、TIM、GDH）活性标准测量方法。 （2）利用“比较测量法”测定酶活性，显著提高了工具酶酶活性测定结果的分辨率和准确性，解决了现有方法不稳定，可操作性差，测量结果无法溯源的瓶颈问题，首次建立了准确可靠的T4 DNA 连接酶、限制性内切酶EcoRI、Taq DNA聚合酶活性的标准测量方法。 （3）通过物理纯度、核酸内切酶检测、核酸外切酶检测、连接再切反应检测，首次建立了工具酶纯度综合评价指标。采用条带强度定量，建立了T4 DNA 连接酶中核酸酶、核酸内切酶和核酸外切酶等污染物测定的标准方法，首次解决了工具酶杂质的科学测定问题。 （4）首次研制完成了《果糖二磷酸钠（FDP）含量测定专用检测固体复合酶（ALD、TIM、GDH）试剂》、《T4 DNA连接酶 酶活及杂质检测方法》两项国家标准。