多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法

谭和平、沈兴中、周李华、唐祥凯、王智、叶德萍

四川省科技进步奖

三等奖

四川省人民政府

2012

生物所

为了合理而审慎地利用好生物技术，扶持和发展我国尚处于起步阶段的高新农业，提升技术标准对生物安全检测的基础支撑能力,针对当前DNA检测方面相关检测结果无法溯源，无法保证测试结果的准确性和可比性的现状，同时考虑到制约多酚类植物产业健康快速发展的关键技术落后的突出问题，项目加大了现代生物技术和量值溯源与传递技术在其相关研究中的应用，深入地开展了多酚类植物基因组DNA制备纯化技术，DNA测试、定值技术，分子标记技术以及量值溯源技术研究。 1、项目将速冻、机械研磨方式应用于多酚类植物基因组DNA制备工艺中，解决了DNA提取时易氧化、褐变的关键技术，填补了国内空白。 2、项目将研制的多酚类植物基因组DNA制备技术成功应用于茶树中，将传统技术制备的茶树 DNA OD值比值（260 nm/280 nm）范围由1.7～2.0缩小为1.81～1.86之间，纯度得到明显提升。该工艺比国内同类研究稳定性、可靠性更好，处于国内领先水平。 3、建立了“多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法”的国家标准，（国标委综合[2011]57号，编号：20110099-T-469）”，很好的为多酚类植物基因遗传研究以及关键量值溯源与传递提供了技术保障。 4、建立了“凝胶成像系统”的校准规范（国质检量函〔2009〕393号），实现了DNA量值准确与可靠有依可循，有据可依，为分子生物学关键量值溯源体系框架提供了重要途径。 本项目的实施为改善多酚类植物相关研究关键技术问题，提供了高纯基因组DNA储备，同时为多酚类植物生物技术研究和多酚类植物产业发展提供了技术标准支撑，制得了国家级茶树品种基因组DNA标准品，为茶树品种鉴定提供了技术和溯源标准，为实现茶树相关量值检测结果的可比溯源与传递提供了物质和管理保障，为建立生物安全量值溯源传递管理体系和量值传递示范提供了支撑。