2018年4月28日，由我院生物研究所承担的《核酸检测关键技术与国家标准研究》项目在第三方专业科技成果评价机构——四川省技术市场协会的组织下，按照科技成果评价的标准及程序，本着科学、独立、客观、公正的原则，对项目科技成果进行了评价。

该项目经历了3个“五年计划”，相关技术成果受到了包括4个国家科技支撑计划、3个质检公益性行业科研专项和4个国家标准项目在内的11个国家级项目经费支持。主要贡献如下：

1.针对加工产品、珍稀样本、DNA量非常少的样本、复杂背景样本等采用现有方法进行核酸制备难度大，方法稳定性和重复性差，质量达不到要求的问题，本项目研究建立了微量核酸提取纯化方法，该方法采用了“加离液剂或表面活性剂进行充分混匀，温浴消化”的样品前处理方式，参照GB/T 33410和GB/T 34794的要求，优选蛋白酶K、琼脂糖凝胶回收试剂盒，确定微量核酸制备的消化条件和回收程序。方法灵敏度高，稳定性和重复性佳。

2.针对现有核酸浓度纯度检测方法的准确性对受检核酸样本的纯度和浓度影响较大，方法适用性有限，方法误差较大的问题，本项目研究建立了水溶液中核酸浓度和纯度检测方法。该方法根据核酸浓度范围，浓度由高到低分别采用了紫外吸收法、荧光分析法、琼脂糖凝胶电泳法以及荧光定量PCR法测定核酸浓度纯度。并采用上述4种方法对基因组DNA、微量cfDNA或ctDNA、微量病毒DNA等不同类型的DNA样本进行了方法的适用性考察，实验结果达到预期效果。方法适用性强，灵敏度高，稳定性和重复性好。

3.针对现有实时荧光PCR方法的可靠性和重复性得不到保障，结果不准确的问题，建立了实时荧光聚合酶链反应定量检测DNA的方法，该方法通过加标回收技术，添加不同浓度水平的参考DNA测定回收率，确定实时荧光聚合酶链反应条件；参照GB/T 34797和GB/T 34776的要求，优选引物探针、工具酶，确定实时荧光聚合酶链反应体系，方法检出限低，稳定性和重复性好，准确度高。

4.通过对吸附柱的最大上样量、吸附柱的承载量、DNA回收产物质量、回收片段范围、回收率等关键技术指标的测定研究。建议了柱式琼脂糖凝胶回收试剂盒的指标要求，并建立了柱式琼脂糖凝胶回收试剂盒性能指标检测方法。

5.通过对核酸引物探针的总量、纯度、相对分子量、碱基准确性、探针修饰基团准确性、扩增性能（特异性、产物大小、引物二聚体）等重要性能指标进行研究，建议了引物探针的质量技术要求，建立了核酸引物探针检测方法。

6.首次制定了《GB/T 34794-2017琼脂糖凝胶回收试剂盒测定通则》、《GB/T 34776-2017  T4 DNA连接酶酶活及杂质检测方法》、《GB/T 34797-2017核酸引物探针质量技术要求》、《GB/T 34796-2017水溶液中核酸的浓度和纯度检测紫外分光光度法》4项国家标准。 

评价专家组一致认为：项目成果填补多项国内空白，整体处于国内领先水平，其中建立的核酸引物探针和琼脂糖凝胶回收试剂盒评价要求和检测方法达到国际先进水平。相关国家标准的实施和技术成果的广泛应用对规范和促进生物产业的健康可持续发展，推进国家重大科学研究计划、国家重要标准制修订和顺利实施起到了关键性支撑作用，成果具有显著的社会经济效益。